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高分辨IEF预制胶条
应用案例:绿色荧光蛋白样本的2DE图谱上)、单克隆抗体样本的2DE图谱(下).
高分辨IEF预制胶条说明书
1.主要特点
用于经典二维蛋白质电泳的高分辨IEF预制胶条的主要特点:
聚焦时间缩短:高分辨IEF预制胶条比同类产品聚焦时间缩短1/3。
全面兼容:可以与众多公司的电泳装置联用。
重复可靠:精确的灌注程序保证不同批次的pH梯度的重现性。
规格齐全:胶条品种多，规格圈，基本覆盖了实验中常用的Ph范围和长度范围。
本系列IEF胶条配合伯楷安两性电解质使用效果最佳。
2.产品规格
不同产品规格、储存及有效期见表1。
表1.正F胶条pH范围、长度、保存及有效期。
| 产品名称 | 长度 | 规格 | 储存及有效期 |
| IEF胶条线性pH3-10 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH3-7 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH4-7 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH5-8 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH6-9 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH7-10 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
| IEF胶条线性pH3-11 | 7cm, 11 cm, 13 cm, 17cm, 18 cm, 24 cm | 12根 | -20°C 1年 |
表2.不同长度的胶条对应的最大水化进样体积。
| IEF胶条长度 | 上样体积 |
| 7cm | 125uL |
| 11cm | 185uL |
| 13cm | 200uL |
| 17cm | 300uL |
| 18cm | 320uL |
| 24cm | 420uL |
使用说明
从冰箱取出-20°C冷冻保存的IEF预制胶条，于室温放置10分钟。加入与胶条对应值范围的两性电解质，一对IEF标准蛋白质或小分子plmarkers，与样本充分混匀成上样溶液。推荐每根7cm胶条需要125L的上样溶液，包括一对IEF标准品各2L(随胶条长度按比例增加)，样本浓度建议0.2-0.5 mg/mL，两性电解质浓度为1%。混匀后的溶液放入水化盘。
用镊子轻轻去除IEF胶条上的保护层。分清正负极(红色端为正极端，另一端为负极端)轻轻将IEF胶条胶面朝下置于水化盘中样品溶液上。不使胶条下面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡，用镊子轻轻地提起胶条的一端，上下移动胶条，直到气泡被赶出胶条以外。
在水化盘内加入矿物油，以防止样本溶液蒸发。矿物油必须缓缓地加在每个槽内，确保完全
地覆盖住胶条。
水化12-24小时后，将IEF胶条转移到等电聚焦电泳仪中聚焦盘进行电泳。
下面的表格给出了建议使用的IEF胶条运行的总volt-hours。不同样品需要的volt-hours不同，下表仅提供参考。当聚焦过程无法达到最高电压时，只要最后能达到总的volt-hours，且7cm胶条电压不低于3000伏，11cm胶条电压不低于5000伏，17cm胶条电压不低于7000伏，24cm胶条电压不低于8500伏，也能对样品进行充分的聚焦:
表3.不同长度胶条推荐使用的最高电压和电压-时间积。
表3.不同长度胶条推荐使用的最高电压和电压-时间积。
| 胶条长度 | 最高电压 | 建议的Volt-Hours |
| 7cm | 2000V | 1,800-3,600 V-hr |
| 11cm | 3000V | 3,000-6,000 V-Hr |
| 13cm | 4000V | 3,600-7,200 V-Hr |
| 17cm | 5000V | 4,700-9.400 V-Hr |
| 18cm | 5000V | 5,000-10,000 V-Hr |
| 24cm | 7000V | 6,600-1,3200 V-Hr |
4.注意事项
特别注意:确保蛋白样本盐份或缓冲液含量在10mM以下，最好在5mM以下，否则电泳时间显著延长，甚至无法获得稳定可靠的蛋白样本聚集电泳分离。
胶条最少需要经过10小时以上的溶胀。即使看上去所有的缓冲液都已经被吸收，也一定要确保胶条在水化盘中溶胀充分的时间。只有在IEF凝胶的孔径已经溶胀充分后，才可以吸收大分子量蛋白质，否则大分子量蛋白质无法进入胶条。
特别注意:推荐的上样溶液体积见表2;不要超出此限制，也不要低于85%推荐体积，否则进样效果变差。
在IEF过程中，如果胶条上面还残留没有被完全吸收的上样溶液，会在胶条的表面形成并联的电流通路，而在这层溶液中蛋白质不会被聚焦。这就会导致蛋白的丢失或是图像拖尾。为了减少形成并联电流通路的可能性，需要将胶条在水化盘中进行充分溶胀，在胶条转移到聚焦盘过程中要用湿润的滤纸仔细地从胶条上吸干多余的液体，然后再将溶胀好的胶条转移到聚焦盘中。
当样品中含盐量较高时，建议先做脱盐处理，避免IEF聚焦电泳失败，减少不必要的浪费。当样品中含盐量很少时，可以选用快速升压，并做限流处理(30-50uL)。
虽然仪器中每根胶条的极限电流可以设为99uA/根。但一般IEF胶条的运行电流不超过50uA/根。
含盐量较高时，建议先做脱盐处理，避免IEF聚焦电泳失败，减少不必要的浪费。当样品中含盐量很少时，
可以选用快速升压，并做限流处理(30-50uA)
产品编号 |
名称 |
规格 |
价格 |
|---|
